Summary: Cytoplasmic extracts from poliovirus type 1-infected HeLa cells labelled with 35S-methionine 3 to 4 h after infection were analysed by sucrose gradient centrifugation, followed by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis. Capsid proteins VP0, VP1 and VP3 were readily detected at 5S (monomeric capsomers) and at 14S (pentamers), whereas capsid precursor polypeptide 1a was detected mainly in a peak at 8S. No capsid polypeptide could be detected sedimenting freely at the top of the gradient. Immunoprecipitation of the labelled material using antibodies raised against individual virus capsid polypeptides showed that all three capsid polypeptides were immunoprecipitated together by either anti-VP1, anti-VP2 or anti-VP3 antisera, suggesting that the polypeptides were not free in the extract, but rather, were maintained in close physical association as the three polypeptide chains of a single capsid protein.

Résumé: Les protéines de capside du poliovirus de type 1 ne sont pas présentes à l'état libre dans le cytoplasme des cellules infectées. Nous avons étudié les premières étapes de la formation des capsomères du poliovirus en fractionnant par centrifugation en gradient de saccharose des extraits cytoplasmiques de cellules HeLa infectées par du poliovirus de type 1 (souche Mahoney) marquées par 35S-méthionine de la 3è à la 4è heure du cycle viral. Les fractions du gradient ont été analysées par électrophorèse en gel de polyacrylamide SDS, soit directement, soit après immunoprécipitation.Les protéines VP0, VP1 et VP3 marquées sédimentent à 5S (monomères) et à 14S (pentamères), et leur précurseur NCVP1a aux positions 5S et 8S. On ne détecte aucune molécule de protéine capsidale dans la région du gradient (2S) où elles auraient dû sédimenter si elles avaient été à l'état libre. Par ailleurs, les anticorps dirigés contre une seule des protéines de capside (VP1, VP2 ou VP3) précipitent en proportions toujours identiques les trois protéines VP0, VP1 et VP3 à la fois. Ils précipitent aussi leur précurseur commun NCVP1a.Cela conduit à suggérer que les protéines capsidales du poliovirus ne sont pas présentes à l'état libre dans le cytoplasme des cellules infectées mais constituent en fait les 3 chaînes polypeptidiques d'une seule protéine de structure qui sédimente à l'état de monomère à 5S. Les clivages endopeptidiques que subit la protéine et qui conduisent à y délimiter les 3 chaînes polypeptidiques VP0, VP1 et VP3 que l'on distingue après dissociation en SDS ne semblent donc pas permettre pour autant l'individualisation physique des trois constituants.

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