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Immunolabelling of Atrazine Residues in Soil

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Immunolabelling of Atrazine Residues in Soil

Auteurs : Alexander Hahn ; Fritz Frimmel ; Albert Haisch ; Günter Henkelmann ; Bertold Hock

Source :

RBID : ISTEX:4B2670A3AEF29602DE08ED3E60401B262A5EAD28

Abstract

An immunolabelling procedure was developed to detect bound pesticide residues in soil using atrazine as an example. Polyclonal antibodies directed against atrazine were raised in rabbits. Antigen‐binding fragments (Fab) were prepared and coupled to the fluorescent stain Rose Bengal B. The dye conjugate produced a fluorescence signal which was related to the amount of atrazine found in native soil samples. Preincubation with unlabelled immunoglobulines (IgG) from preimmune sera proved to be essential for blocking unspecific binding of the antibodies which varied greatly between different samples of soil material. Labelled antibodies, whose specific binding sites had been blocked by free atrazine, were used as controls. Strong unspecific labelling, which also could be suppressed with IgG from preimmune sera, was observed in a soil under a barn. Changes due to the permanent dryness and the lack of aeration are discussed as possible causes.

Url:
DOI: 10.1002/jpln.19921550308

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<p>An immunolabelling procedure was developed to detect bound pesticide residues in soil using atrazine as an example. Polyclonal antibodies directed against atrazine were raised in rabbits. Antigen‐binding fragments (Fab) were prepared and coupled to the fluorescent stain Rose Bengal B. The dye conjugate produced a fluorescence signal which was related to the amount of atrazine found in native soil samples. Preincubation with unlabelled immunoglobulines (IgG) from preimmune sera proved to be essential for blocking unspecific binding of the antibodies which varied greatly between different samples of soil material. Labelled antibodies, whose specific binding sites had been blocked by free atrazine, were used as controls. Strong unspecific labelling, which also could be suppressed with IgG from preimmune sera, was observed in a soil under a barn. Changes due to the permanent dryness and the lack of aeration are discussed as possible causes.</p>
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<p>Immunmarkierung von Atrazinrückständen im Boden Zur Erfassung gebundener Rückstände von Pflanzenbehandlungsmitteln im Boden wurde am Beispiel des Atrazins ein Immunmarkierungsverfahren entwickelt. Polyklonale Antikörper gegen Atrazin wurden in Kaninchen gewonnen. Daran schloß sich die Kopplung der antigenbindenden Fragmente (Fab) an den Fluoreszenzfarbstoff Bengalrosa an. Das Farbstoffkonjugat lieferte ein Fluoreszenzsignal, das bei nativen Böden mit der Menge an gebundenem Atrazin korreliert war. Zur Blockierung unspezifischer Antikörperbindungen, die zwischen den einzelnen Bodenproben stark schwankten, erwies sich eine Vorinkubation mit unmarkierten Präimmunseren als essentiell. Als Nullkontrollen dienten markierte Antikörper, deren spezifische Bindungsstellen durch freies Atrazin blokkiert waren. Starke unspezifische Bindungen, die ebenfalls durch Inkubation mit Präimmunseren beseitigt werden konnten, wurden bei einem unter einer Scheune entnommenen Boden beobachtet. Als Ursache werden Veränderungen durch permanente Trockenheit und Luftabschluß diskutiert.</p>
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<p>An immunolabelling procedure was developed to detect bound pesticide residues in soil using atrazine as an example. Polyclonal antibodies directed against atrazine were raised in rabbits. Antigen‐binding fragments (F
<sub>ab</sub>
) were prepared and coupled to the fluorescent stain Rose Bengal B. The dye conjugate produced a fluorescence signal which was related to the amount of atrazine found in native soil samples. Preincubation with unlabelled immunoglobulines (IgG) from preimmune sera proved to be essential for blocking unspecific binding of the antibodies which varied greatly between different samples of soil material. Labelled antibodies, whose specific binding sites had been blocked by free atrazine, were used as controls. Strong unspecific labelling, which also could be suppressed with IgG from preimmune sera, was observed in a soil under a barn. Changes due to the permanent dryness and the lack of aeration are discussed as possible causes.</p>
</abstract>
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<p>
<b>Immunmarkierung von Atrazinrückständen im Boden</b>
</p>
<p>Zur Erfassung gebundener Rückstände von Pflanzenbehandlungsmitteln im Boden wurde am Beispiel des Atrazins ein Immunmarkierungsverfahren entwickelt. Polyklonale Antikörper gegen Atrazin wurden in Kaninchen gewonnen. Daran schloß sich die Kopplung der antigenbindenden Fragmente (F
<sub>ab</sub>
) an den Fluoreszenzfarbstoff Bengalrosa an. Das Farbstoffkonjugat lieferte ein Fluoreszenzsignal, das bei nativen Böden mit der Menge an gebundenem Atrazin korreliert war. Zur Blockierung unspezifischer Antikörperbindungen, die zwischen den einzelnen Bodenproben stark schwankten, erwies sich eine Vorinkubation mit unmarkierten Präimmunseren als essentiell. Als Nullkontrollen dienten markierte Antikörper, deren spezifische Bindungsstellen durch freies Atrazin blokkiert waren. Starke unspezifische Bindungen, die ebenfalls durch Inkubation mit Präimmunseren beseitigt werden konnten, wurden bei einem unter einer Scheune entnommenen Boden beobachtet. Als Ursache werden Veränderungen durch permanente Trockenheit und Luftabschluß diskutiert.</p>
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<abstract lang="en">An immunolabelling procedure was developed to detect bound pesticide residues in soil using atrazine as an example. Polyclonal antibodies directed against atrazine were raised in rabbits. Antigen‐binding fragments (Fab) were prepared and coupled to the fluorescent stain Rose Bengal B. The dye conjugate produced a fluorescence signal which was related to the amount of atrazine found in native soil samples. Preincubation with unlabelled immunoglobulines (IgG) from preimmune sera proved to be essential for blocking unspecific binding of the antibodies which varied greatly between different samples of soil material. Labelled antibodies, whose specific binding sites had been blocked by free atrazine, were used as controls. Strong unspecific labelling, which also could be suppressed with IgG from preimmune sera, was observed in a soil under a barn. Changes due to the permanent dryness and the lack of aeration are discussed as possible causes.</abstract>
<abstract lang="de">Immunmarkierung von Atrazinrückständen im Boden Zur Erfassung gebundener Rückstände von Pflanzenbehandlungsmitteln im Boden wurde am Beispiel des Atrazins ein Immunmarkierungsverfahren entwickelt. Polyklonale Antikörper gegen Atrazin wurden in Kaninchen gewonnen. Daran schloß sich die Kopplung der antigenbindenden Fragmente (Fab) an den Fluoreszenzfarbstoff Bengalrosa an. Das Farbstoffkonjugat lieferte ein Fluoreszenzsignal, das bei nativen Böden mit der Menge an gebundenem Atrazin korreliert war. Zur Blockierung unspezifischer Antikörperbindungen, die zwischen den einzelnen Bodenproben stark schwankten, erwies sich eine Vorinkubation mit unmarkierten Präimmunseren als essentiell. Als Nullkontrollen dienten markierte Antikörper, deren spezifische Bindungsstellen durch freies Atrazin blokkiert waren. Starke unspezifische Bindungen, die ebenfalls durch Inkubation mit Präimmunseren beseitigt werden konnten, wurden bei einem unter einer Scheune entnommenen Boden beobachtet. Als Ursache werden Veränderungen durch permanente Trockenheit und Luftabschluß diskutiert.</abstract>
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